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細(xì)胞劃痕實驗-第三方檢測機構(gòu)
發(fā)布時間: 2024-07-08 點擊次數(shù): 106次細(xì)胞劃痕實驗又叫創(chuàng)傷愈合實驗,當(dāng)細(xì)胞生長至融合成單層狀態(tài)時,在細(xì)胞層上人為制造一個空白區(qū)域,稱為“劃痕/傷口”,通過一段時間的培養(yǎng),邊緣的細(xì)胞會逐漸向無細(xì)胞區(qū)域遷移,使“傷口”愈合,通過測量細(xì)胞遷移距離及速度反映細(xì)胞的遷移能力及修復(fù)能力。
在化妝品修復(fù)功效評價中,細(xì)胞劃痕實驗可以模擬皮膚受損后的自然愈合過程,用于觀察化妝品等外源因素對細(xì)胞遷移、修復(fù)和相互作用的影響。
中科檢測可開展細(xì)胞劃痕實驗,評估化妝品成分或產(chǎn)品對促進皮膚修復(fù)和愈合效果,出具的化妝品修復(fù)功效評價報告具有CMA資質(zhì)。
細(xì)胞劃痕實驗應(yīng)用方向
遷移能力:實驗中細(xì)胞遷移填充劃痕區(qū)域的速度可以作為評估化妝品促進皮膚愈合的一個指標(biāo)。在實驗中表現(xiàn)出強遷移能力的化妝品成分,可能在實際應(yīng)用中有助于加快皮膚受損區(qū)域的修復(fù)。
增殖效果:細(xì)胞在劃痕區(qū)域的增殖情況反映了化妝品促進皮膚細(xì)胞再生的潛力。增殖效果好的化妝品可能在實際使用中有助于皮膚恢復(fù)活力和彈性。
安全性評估:通過細(xì)胞劃痕實驗可以初步評估化妝品成分的安全性。如果在細(xì)胞水平上沒有表現(xiàn)出毒性或負(fù)面影響,這為進一步的體內(nèi)測試和人體試驗提供了基礎(chǔ)。
劑量效應(yīng)關(guān)系:實驗中可以測試不同濃度的化妝品成分,以確定有效劑量和安全劑量范圍,這有助于指導(dǎo)產(chǎn)品配方的開發(fā)。
長期效果預(yù)測:雖然細(xì)胞劃痕實驗是短期的,但它可以為預(yù)測長期皮膚修復(fù)效果提供一定的依據(jù)。例如,能夠顯著促進細(xì)胞遷移和增殖的成分,可能在實際使用中有助于減少疤痕形成。
臨床試驗:細(xì)胞劃痕實驗的結(jié)果需要通過臨床試驗來驗證。臨床試驗可以在實際皮膚上評估化妝品的效果,包括愈合時間、皮膚質(zhì)地改善和整體修復(fù)效果。
綜合評估:細(xì)胞劃痕實驗只是評估化妝品修復(fù)功效的多種方法之一。它的結(jié)果需要與分子水平的研究、動物模型實驗以及其他體外實驗結(jié)果相結(jié)合,以全面評價化妝品的功效。
細(xì)胞劃痕實驗原理
細(xì)胞劃痕實驗是通過在細(xì)胞單層上劃痕并通過延時顯微鏡定期捕獲圖像,從而研究細(xì)胞遷移運動、修復(fù)能力和細(xì)胞間相互作用的實驗室技術(shù),基本原理是:在融合的單層細(xì)胞上人為制造一個空白區(qū)域,稱為“劃痕/傷口”,劃痕邊緣的細(xì)胞會逐漸進入空白區(qū)域使“劃痕/傷口”愈合,于細(xì)胞遷移過程中在開始和定期捕獲圖像,通過測量不同時間點的劃痕間距并計算差值,可對細(xì)胞的遷移能力做出判斷。
細(xì)胞劃痕實驗步驟
1、準(zhǔn)備
所有能滅菌的器械都要滅菌,包括直尺(或者24孔板蓋)和marker筆在操作前紫外照射30min(超凈臺內(nèi))。
2、流程
1)鋪板:將細(xì)胞消化后加入培養(yǎng)基終止消化,將細(xì)胞吹打均勻,然后按比例鋪板。如果不均勻可以用手掌對著一橫邊和一縱邊輕輕拍打,切忌四個邊都拍打,這樣細(xì)胞很容易聚到中間。
2)掌握細(xì)胞狀態(tài),過夜能長滿為佳。
3)第二天用黃槍頭比著直尺(或者槍頭,板蓋),垂直在原來的培養(yǎng)基里劃痕,每孔1道(也可多劃幾道,參考細(xì)胞狀態(tài)),槍頭要垂直,不能傾斜。
4)用PBS清洗細(xì)胞1-2次,去除劃下的細(xì)胞,加入低血清培養(yǎng)基(或者培養(yǎng)基);然后去顯微鏡下拍照,盡量高倍鏡低倍鏡都拍照,可以事先在板子底部用Marker筆畫上小圓圈標(biāo)記來保證能拍到同一個點,作好記錄。
5)加藥,放入37度5%CO2培養(yǎng)箱,培養(yǎng)時間依照實驗要求進行,通常以12h、24h、48h為準(zhǔn)。按所需時間節(jié)點安排取樣拍照時間。
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